|
|
Enzyme kinetic evaluation of several potential inhibitors of certain human cysteine and serine proteases
Hympánová, Michaela ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
IN CZECH Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Školitelé: prof. Dr. Michael Gütschow RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Kandidát: Michaela Hympánová Název diplomové práce: Hodnocení enzymové kinetiky několika potenciálních inhibitorů lidských proteáz cysteinového a serinového typu Úvod Enzymy řadící se mezi cysteinové a serinové proteázy jsou součástí mnoha fyziologických procesů. Nerovnováha mezi enzymy a jejich endogenními inhibitory patří mezi faktory účastnící se rozvoje řady chorob, například nádorových onemocnění nebo osteoporózy. Syntetické inaktivátory by proto mohly být užitečné v léčbě těchto patologických stavů. Některé látky jsou již ve vývoji a dohledatelné v literatuře. Náplní této diplomové práce je hodnocení inhibičního potenciálu látek syntetizovaných skupinou prof. Gütschowa proti vybraným lidským proteázám. Testované látky patří mezi imidazolové sloučeniny pocházející z N-chráněného cyclohexylalaninu, sloučeniny získané substitucí 2-phenyl-7,8- dihydroimidazo[1,2-a]pyrazin-6(5H)-onu, -nenasycené peptidomimetické sloučeniny, karbamáty, deriváty N,N-dibenzyl-krotonamidu a peptoidy. Cíle Cílem této diplomové práce bylo zhodnotit nové potenciální inhibitory pomocí testování na katepsinech B, L, S a K, které jsou zástupci...
|
|
|
Katepsin L z klíštěte obecného (Ixodes ricinus)
Talacko, Pavel ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent)
Klíšťata patří mezi významné parazity člověka, kteří přenášejí řadu patogenů. V Evropě je hlavním druhem klíště obecné Ixodes ricinus přenášející bakterii Borrelia burgdorferi (způsobující Lymskou boreliosu) a vir klíšťové encefalitidy. Při trávení proteinů z krve hrají důležitou roli katepsinové proteasy v žaludku klíštěte. Tato práce se zabývá katepsinem L, který je znám jako významná cysteinová trávící proteasa klíšťat. Byl připraven rekombinantní katepsin L z I. ricinus, který byl chromatograficky izolován z kultivačního media expresního systému Pichia pastoris. Izolovaný katepsin L byl charakterizován pomocí N-koncového proteinového sekvenování a pomocí značení fluorescenční aktivitní značkou Green-DCG-04. Analýza substrátové a inhibiční specifity katepsinu L pomocí peptidových substrátů a inhibitorů prokázala Z-FR-AMC jako vhodný substrát s pH optimem 3,5 a Z-FF-DMK jako účinný inhibitor. Byla zjištěna schopnost katepsinu L degradovat proteinové substráty HSA a hemoglobin v silně kyselém prostředí (pH 3,5-4,5). Proteolytická aktivita se stejnými charakteristikami jako byly určeny u rekombinantního katepsinu L byla identifikována v extraktu ze slinných žláz a ve slinách klíštěte I. ricinus. Jde o první nález katepsinové proteasy ve slinách klíšťat. Lze předpokládat, že katepsin L sekretovaný...
|
|
|
Detekce a kvantifikace inhibitorů proteáz v klíštěti \kur{Ixodes ricinus} pomocí monoklonálních protilátek
VANÍČKOVÁ, Martina
Inhibitory proteáz v klíštěti hrají hlavní roli v průběhu sání klíštěte. Sliny klíštěte obsahují bioaktivní látky, díky kterému je schopné modulovat hostitelovu imunitu v průběhu sání, a tak nerušeně sát po neomezeně dlouhou dobu. V průběhu dlouhého sání tak může docházet i k přenosům klíšťaty přenášených chorob. Narušením funkce inhibitorů proteáz může být snížen přenos patogenů. V této práci jsem se zabývala výrobou monoklonálních protilátek, které jsem použila k detekci a kvantifikaci dvou inhibitorů serinových proteáz v orgánech a slinách klíštěte obecného.
|
|
|
Enzyme kinetic evaluation of several potential inhibitors of certain human cysteine and serine proteases
Hympánová, Michaela ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Janďourek, Ondřej (oponent)
IN CZECH Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Školitelé: prof. Dr. Michael Gütschow RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Kandidát: Michaela Hympánová Název diplomové práce: Hodnocení enzymové kinetiky několika potenciálních inhibitorů lidských proteáz cysteinového a serinového typu Úvod Enzymy řadící se mezi cysteinové a serinové proteázy jsou součástí mnoha fyziologických procesů. Nerovnováha mezi enzymy a jejich endogenními inhibitory patří mezi faktory účastnící se rozvoje řady chorob, například nádorových onemocnění nebo osteoporózy. Syntetické inaktivátory by proto mohly být užitečné v léčbě těchto patologických stavů. Některé látky jsou již ve vývoji a dohledatelné v literatuře. Náplní této diplomové práce je hodnocení inhibičního potenciálu látek syntetizovaných skupinou prof. Gütschowa proti vybraným lidským proteázám. Testované látky patří mezi imidazolové sloučeniny pocházející z N-chráněného cyclohexylalaninu, sloučeniny získané substitucí 2-phenyl-7,8- dihydroimidazo[1,2-a]pyrazin-6(5H)-onu, -nenasycené peptidomimetické sloučeniny, karbamáty, deriváty N,N-dibenzyl-krotonamidu a peptoidy. Cíle Cílem této diplomové práce bylo zhodnotit nové potenciální inhibitory pomocí testování na katepsinech B, L, S a K, které jsou zástupci...
|
|
|
Katepsin L z klíštěte obecného: analýza proteolytické aktivity a její regulace
Talacko, Pavel ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Ryšlavá, Helena (oponent)
Klíště obecné (Ixodes ricinus) je parazit sající krev, jehož význam spočívá v přenosu patogenů způsobujících klíšťovou encefalitidu nebo lymskou boreliosu. Při trávení proteinů z krve hostitele hrají důležitou roli katepsinové proteasy. Tyto proteiny jsou zajímavé jako antigeny pro vývoj protiklíštěcích vakcín. Tato práce se zabývá katepsinem L z klíštěte obecného, konkrétně isoenzymy IrCL1 a IrCL3. IrCL1 byl exprimován v kvasinkách Pichia pastoris a chromatograficky purifikován z expresního media. Byla určena substrátová specifita IrCL1 pomocí štěpení (a) peptidových fluorogenních substrátů, (b) proteinových substrátů analyzovaných hmotnostní spektrometrií. Proteolytická aktivita IrCL1 byla modulována interakcí s glykosaminoglykany, která ovlivňuje aktivitní pH optimum. Dále byl připraven proteolyticky aktivní mutant IrCL1 s redukovaným počtem N-vázaných oligosacharidů vhodný pro krystalizační experimenty. IrCL3 byl exprimován v Escherichia coli, refoldován a aktivován do funkční formy. Proteolytická aktivita IrCL3 v řadě aspektů připomíná IrCL1 včetně substrátové specifity, kyselého pH optima a modulační interakce s glykosaminoglykany. Klíčová slova: cysteinové proteasy, katepsin L, klíště Ixodes ricinus, substrátová specifita, proteolytická aktivita
|
|
|
Katepsin L z klíštěte obecného (Ixodes ricinus)
Talacko, Pavel ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce)
Klíšťata patří mezi významné parazity člověka, kteří přenášejí řadu patogenů. V Evropě je hlavním druhem klíště obecné Ixodes ricinus přenášející bakterii Borrelia burgdorferi (způsobující Lymskou boreliosu) a vir klíšťové encefalitidy. Při trávení proteinů z krve hrají důležitou roli katepsinové proteasy v žaludku klíštěte. Tato práce se zabývá katepsinem L, který je znám jako významná cysteinová trávící proteasa klíšťat. Byl připraven rekombinantní katepsin L z I. ricinus, který byl chromatograficky izolován z kultivačního media expresního systému Pichia pastoris. Izolovaný katepsin L byl charakterizován pomocí N-koncového proteinového sekvenování a pomocí značení fluorescenční aktivitní značkou Green-DCG-04. Analýza substrátové a inhibiční specifity katepsinu L pomocí peptidových substrátů a inhibitorů prokázala Z-FR-AMC jako vhodný substrát s pH optimem 3,5 a Z-FF-DMK jako účinný inhibitor. Byla zjištěna schopnost katepsinu L degradovat proteinové substráty HSA a hemoglobin v silně kyselém prostředí (pH 3,5-4,5). Proteolytická aktivita se stejnými charakteristikami jako byly určeny u rekombinantního katepsinu L byla identifikována v extraktu ze slinných žláz a ve slinách klíštěte I. ricinus. Jde o první nález katepsinové proteasy ve slinách klíšťat. Lze předpokládat, že katepsin L sekretovaný...
|
host ::
RSS.